Hyödyllisia tietoja endotoksiineista

Hyödyllisiä tietoja endotoksiineista ja niiden tunnistamisesta Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) assays

Endotoksiinia (lipopolysakkaridi, LPS) tuottavat ainoastaan gramnegatiiviset bakteerit, kuten Escherichia coli,, Salmonella enteritidis, Legionella pneumophila, Campylobacter jejuni, Vibrio cholerae, Shigella dysenteriae, Pseudomonas aeruginosa ja vielä monet muut. Endotoksiinipitoisuus ilmaistaan yksiköllä EU.

1 EU = 100 pg endotoksiinia.

1 pikogramma = 10-12 grammaa tai 0,000000000001 grammaa

Yhdessä erityisessä gramnegatiivisessa bakteerikan-nassa on määritetty, että suunnilleen 7000 bakteerisolua sisältää 1 EU:n
(Scan Dia Labs, julkaisematon tieto).

 

Menetelmät LPS:n vapauttamiseksi gramnegatiivisista bakteerisoluista:

Luonnollinen solukuolema ja bakteriolyysi

LPS:n eristäminen vesirakkuloiden tai kalvon pisaroiden
Seerumiproteiinin kautta tai komplementtivälitteisesti
Isäntäfagosyytistä imun ja sen jälkeisen LPS:n eksosytoosin kautta Antibioottivälitteisesti

 

Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) -kokeet endotoksiinin tunnistamiseen:

Hyytymätesti Gel-Clot

Kapea herkkyysalue ja parhaimmillaan vain puolikvantitatiivinen.

Maksimiherkkyys: 0.03 EU/ml.

Kromogeenisissa kokeissa käytetään synteettistä kromogeenistä peptidiä korvaamaan juoksete-entsyymiä juokseteproteiinin sijasta. Kromogeenisen substraatin hydrolyysi suoritetaan juoksete-entsyymillä, mikä vapauttaa kromogeenisen vaikuttavan osan keltaisella värillä. Maksimiherkkyys >0.01 EU/ml.

Kineettis-turbidimetrinen menetelmä

Mittaa LAL-LPS -reaktion määrän tai vaadittavan ajan siihen, että reaktio saavuttaa määritetyn optisen tiheyden. Kvantitatiivinen. Helpottaa näytteen inhibition/enhancement-ilmiön arviointia. Maksimiherkkyys: >0.005 EU/ml.

menetelmä
Non-kompetitiivinen C-peptidi ELISA ja Sandwich-ELISA käyttäen monoklonaalisia vasta-aineita ja raketti-immunoelektroforeettinen koe, joka mittaa juokseteproteiinin kvantitatiivista kulutusta käyttäen jäniksen vasta-aineita proteiinia vastaan, ovat kaikki elegantteja. Kuitenkin monimutkaiset ja aikaavievät valmistelutoimenpiteet estävät niiden laajemman käytön.

 

LAL-kokeen interferenssin mekanismit:

Suboptimaaliset pH-olosuhteet

Kontrolliendotoksiinin huippujen aggregaatio tai adsorptio
Epäsopivat kationiolosuhteet
Entsyymi- tai proteiinimodifikaatio
Ei-spesifinen LAL-aktivaatio - joskus interferenssin mekanismia ei voi määritellä

  • ELISA-menetelmät ja raketti-immunoelektroforeettinen

  • Kromogeeniset ja loppupiste-turbidimetriset menetelmät

Head Office & Central Laboratory:
Scan Dia Labs ApS
KELLERSHUS
Brejning Strand 1 E
DK - 7080 Børkop
Denmark
Tel: (+45) 3963 4855
mail@scandialabs.com