内毒素(脂多糖,LPS)是由革兰氏阴性菌专门产生的,诸如大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、嗜肺军团菌、空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、痢疾杆菌、绿脓假单胞菌和很多很多革兰氏阴性菌都产生内毒素。 内毒素的浓度用 EU 表示。

1 EU = 100 pg 内毒素。

1 皮克 = 10-12 克或 0.000000000001 克。

对于一个革兰氏阴性菌的特定菌株已经作出测定,大约 7000 个细菌细胞含有 1 EU(Scan Dia Labs,未发表的数据)。

从革兰氏阴性菌细胞释放 LPS 的机制:

自然细胞死亡和溶菌作用

LPS 通过释放气泡或细胞膜小泡脱落

血清蛋白和补体介导的释放

宿主噬菌细胞摄取抗 LPS 介导释放后的胞外分泌

用于测定内毒素的鲎基质显色 (LAL) 试验

< 鲎试剂定性凝胶技术

灵敏度范围狭窄,且充其量仅仅是半定量分析。

最大灵敏度: 0.03 EU/ml。

< 生色和终点浊度技术

生色测定利用合成的生色肽作为底物用于凝固蛋白原适当的凝固酶。 所述生色底物经凝固酶水解,释放最终带有黄色的生色部分。最大灵敏度 > 0.01 EU/ml。

 

< 动态浊度技术

 

测量 LAL-LPS 反应率或达到特定光密度所需的反应时间。定量的。简化评定样本的抑制/增强。最大灵敏度: >0.005 EU/ml。

< 联免疫法(ELISA)技术和火箭免疫电泳技术

非竞争 C-肽 ELISA 和夹心 ELISA 应用单克隆抗体,以及火箭免疫电泳法利用兔子抗蛋白抗体测量凝固酶数量上的消耗,都是巧妙的方法。 可是结构复杂和耗时的安装过程妨碍了它们的广泛应用。

 

 LAL 试验干扰机制

未达最佳标准的 pH 条件

对照内毒素波峰的聚集和吸附

不适宜的阳离子浓度

酶或蛋白的修饰

非特异 LAL 活性 - 有时候不能确定某种干扰机制

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